• 热门搜索:

基因工程综合实验“转基因斑马鱼构建”的实施修改方案

发布时间:2016-04-08 点击:628

生科院领导及生物学实验中心主任:

《基因工程》课程综合实验---转基因斑马鱼的构建实施方案(讨论稿)2009年4月份由邓云老师呈向院里并已获得院校两级审批,然而此方案在2009年8月22号学院教学工作会议上却得到了否决,之后课程负责人与实验中心主任再度协商仍未得到许可。

基因工程课程在开课起初几年(2002-2004年)是为本科生开设了实验课的,主要开设的实验包括大肠杆菌感受态细胞的制备及载体DNA分子导入原核细胞,质粒DNA的提取,PCR基因扩增实验以及真核基因组DNA的提取等5个实验(我们有自编的《基因工程原理与技术》实验指导)。自2005年起,由于实验内容与分子生物学重复,而分子生物学课程又比基因工程早开一个学期,于是经过院教学办同意,决定将基因工程实验与分子生物学实验整合,由分子生物学任课老师(周建林)和基因工程任课老师(袁婺洲)共同完成实验课的指导。后来由于实验中心的人事变动,相关实验完全由实验中心安排,基因工程的任课老师没再参与到实验教学中,以至于院方和学生方都认为基因工程没有实验课,分子生物学才有实验课。

2008年,基因工程课程成功获得学校和湖南省精品课程立项建设,2009年《基因工程》本科教学项目又成功获得国家精品课程立项,这是该教学团队和学院共同努力取得的结果,相信学校和生科院一定希望把这门课程建设好,在三年建设期满后争取通过验收。实验教学改革是基因工程国家精品课程建设的一个重要方面。基因工程综合实验“转基因斑马鱼的构建”是实验改革的主要内容。按照建设要求,需要完全按照表一内容进行组织和实施,这样才能保证学生了解和掌握基因工程操作的整个流程。

表一   基因工程综合实验“转基因斑马鱼构建”的实验内容、学时分配与组织  


序号  

实验项目名  称

内  容 提 要

实验性质  

实验类型  

学时分配  

每组人数  

备注  

1

目的基因的获取与重组载体的构建

1.以pEGFP-C2为载体,组织特异启动子为供体DNA,进行连接。  

2.感受态细胞的制备;

4.重组子转化的鉴定

专业基础  


9

4

必做  

2

质粒的提取与重组子的鉴定  

1.质粒的小量提取

2.限制性核酸内切酶进行酶切鉴定

3.PCR鉴定

专业基础  


8

4

必做  

3

重组载体的线性化和受体系统的获得

1.表达质粒的大量制备

2.表达质粒的线性化及回收纯化

3.鱼受精卵的获得及培养

专业基础  

 提高型

5

4

必做  

4

显微注射及转基因表型分析  

1   1.   显微注射制备转基因鱼

2.  转基因鱼的表型鉴定

3、转基因鱼纯合子的获得

综合  

提高型(综合型)  

12

4

必做  

   

考虑到实验中心一再强调感受态细胞的制备、重组载体的构建与转化子的鉴定、质粒的小量提取及酶切和PCR鉴定等前期的实验已经在分子生物学实验里做过,不同意另外在基因工程实验里重复(我们只是想强调基因工程实验流程的完整性,因为分子生物学实验里构建的载体和目的片段不是我们需要的),我们也只好将实验内容进行调整。重组质粒的构建和鉴定作为我们实验的准备工作,而本科生的操作从质粒的大量制备、线性化载体的获得开始,到受体鱼受精卵的获得与培养,显微注射制备转基因鱼,最后完成转基因鱼的表型鉴定等实验内容。修改后的实验内容如表二所示。

表二    基因工程综合实验“转基因斑马鱼构建”修改后的实验内容与学时分配

序号

实验内容与名称

实验类型与性质

学时分配

每组人数

1

重组表达质粒pEGFP-C2-心脏特异启动子的大量制备

专业技术实验

3

4

2

重组表达质粒的线性化及回收纯化

专业技术实验

3

4

3

受体系统鱼受精卵的获得及培养

专业技术应用

3

4

4

用显微注射法制备转基因斑马鱼鱼

专业技术应用

6

4

5

转基因斑马鱼的表型鉴定与转基因纯系的获得

专业技术应用

6

4

为了保证表二实验内容的完成,除了利用实验中心分子生物学实验室已有的实验设备和条件以外,还必须添置转基因斑马鱼制作专用的一些仪器设备,包括斑马鱼实验动物饲养所需要的恒温独立培养室一间(使用面积25M2左右)和自动水循环系统一套,以及转基因制作和鉴定所需要的带CCD的荧光体式显微镜一台(奥林巴斯SZX16)、带CCD的荧光倒置显微镜一台(奥林巴斯BX41)、手动显微注射器(国产)15台、国产体式显微镜10台(可容纳10人同时操作)。这些设备和仪器已经在学校审批过的《基因工程》课程综合实验---转基因斑马鱼的构建实施方案(讨论稿)中列出并已报批学校物资处,请学院和实验中心尽早购置。

以上修改的基因工程实验实施方案和所需设备条件,希望院领导和实验中心同意并支持!

 

 

基因工程课程负责人

袁婺洲

2009年9月30日


此篇来自:湖南师范大学生物学实验中心